Uji Enzim dengan Jenis Bakteri yang Berbeda dalam Purifikasi dan Preparasi Analisis Enzim Proteolitik #4
August 2, 2012
Kerja dan Stabilitas Enzim dalam Purifikasi dan Preparasi Analisis Enzim Proteolitik #6
August 2, 2012

Uji Kerja Caseinolitik dalam Purifikasi dan Preparasi Analisis Enzim Proteolitik #5

Aktifitas kaseinolitik dianalisis dengan kasein sebagai substrat dengan prosedur yang telah diadopsi dari Rick yang ditandai dengan pelepasan asam trikloroasetat yang melarutkan tirosin di estimasi dengan reagen Folin Ciocaltecau.

Pada 1 ml dari larutan 1% kasein di tabung reaksi ditambahkan sampel dari preparat enzim yang telah dimurnikan dan dilarutkan dalam 0,025 Tris buffer pada pH 9,0. Setelah diinkubasi selama 1 jam pada suhu 370C dengan pengocokan, 3,0 ml dari larutan 5% asam trikloroasetat ditambahkan dan campuran tersebut disaring dengan kertas saring Whatman no 1. 0,5 ml filtrat , 10 ml 0,5 N NaOH dan 3,0 ml dari larutasn reagen fenol dicampur dalam erlenmeyer 50 ml. 10 menit setelah penambahan reagen fenol , absorbansi dari campuran ditentukan denga colorimeter ada panjang gelombang 540 nm. Blanko dari larutan asam trikloroasetat yang ditambah reagen fenol juga dianalisis sebagai koreksi.

Unit aktifitas kaseinolitik didefinisikan dari jumlah enzim yang menghidrolisis kasein pada laju inisial kasein terhidrolisis yang terbentuk permenit dan mempunyai optical density yang sama dengan reaksi reagen fenol dengan tirosin. Untuk masing-masing enzim, pembuatan kurva diplotkan dengan jumlah tirosin yang dilepaskan.